Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展比较慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出呼吸道自身HIV到显现出1HG哮喘诊疗症状的成果率在成人一时期就有更好的详细描述，多个呼吸道自身HIV感染性的成人里面有70%在血清叠加后10月内患上哮喘，而随访15年的成人这一数量减小到84%。远比之下，占诊疗1HG哮喘一半以上的HG1HG哮喘的肺癌前提还很难给予充分的数据分析方法。

越来越多的人开始用于分期该系统来定义1HG哮喘的成果：个形体在显现出多种呼吸道自身HIV时踏入第1先决条件，显现出血糖异常时踏入第2先决条件，显现出症状时踏入第3先决条件。一些多发呼吸道自身HIV感染性的个形体，在1期和2期，成果较慢，并发展为肺癌的1HG哮喘。我们之前详细描述了一四组在首次样品到多种呼吸道自身HIV样本后至少10年无哮喘的极慢成果者，这四组症状数目少，但特征非常明确。随后，我们发现呼吸道自身抗体特异性CD8+T蛋白重排在成果很慢的症状里面基本不假定，但在近期肺癌和近十年假定的哮喘症状里面很容易样品到。这显然表明，与成果症状远比，这些症状自身免疫重排的调节增强。

早期数据分析方法表明，尽管调节性T蛋白(Treg)数量正常人，但哮喘症状假定一些功能毛病，其里面仅限于对IL-2的重排能力提高。此外，哮喘症状里面的畸变CD4+T蛋白显然对调节更具抵抗性，表现为畸变T蛋白的依赖性减慢，自然地诱发的Treg和形体外诱发的诱导Treg，以及抗体漫长的CD4+T蛋白里面IL-2重排减慢。本数据分析方法的目的是详细描述了CD4+调节性T蛋白(Treg)在在在极很慢成果者里面的特征，他们的平均年岁为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX数据分析方法是一项以人群相结合的纵向数据分析方法，在21岁所列肺癌的症状长子女里面检测1HG哮喘的危险因素。我们之前详细描述了近十年很慢成果者的特征，他们保持多重呼吸道自身HIV感染性超过10年，但很难显现出哮喘的诊疗症状，慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保持无哮喘并愿意共享大量血液循环样本的很慢成果者延展到T和B蛋白功能分析方法。在目前的数据分析方法里面，8名慢成果者(SP四组)，里面位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道自身HIV感染性。所有的行动者都所处1HG哮喘成果的1期，尽管一些人随后保住了呼吸道自身HIV对某些抗体的感染性重排，然而，一名症状已经所处2期至少6年，但很难显现出诊疗症状，一名症状被诊断为哮喘，该成年人72岁，在采集实验样本时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法里面对该NADP展开了实际上评估。除去外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白绝技和T蛋白依赖性试验评估NADP里面Treg的Hz、表HG和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)展开无都由聚类分析方法，评估Treg表HG。

结果：与身心健康NADP远比，来自慢成果形体的知觉CD4+T蛋白的都由聚类辨识，激活的知觉CD4+ TregHz减小，与抗生素诱导的TNFR该系统性蛋白(GITR)隐含减小有关。一名HbA1c增大的症状与成果很慢者和也就是说的比对四组远比，Treg明人有所不同。功能分析方法表明，与身心健康NADP远比，来自很慢成果形体的Treg介导的CD4+畸变T蛋白依赖性明显毁坏。表现为对畸变CD4+T蛋白CD25和CD134隐含的依赖性减小。

布1 集中的表HG分析方法辨识，CD4+TregHIV-在慢成果数据流里面减小。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标有物隐含检验出10个元簇:知觉T蛋白_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T蛋白;HLA-DR + GITR +知觉T蛋白;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用于9个不同Treg标有作用于的10个元簇的MST。每个节点象征性一个协同(100个协同)，相当大的元协同(10个元协同)在节点四组周围制做。每个节点里面的面包布坚称单个标有的隐含分级。(b)每个元聚类的热布，以辨识整形体标有隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)作用于布，以及FlowSOM辨识的每个元簇的很薄。(e-l)相对稀土元素为每个metacluster箱线或布(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T蛋白(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T蛋白(l)。黄色圆圈象征性捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 用于CITRUS的预测模HG证实，TregHz的减小是成果很慢的图标。分级门控(a - f)和柑橘分析方法(g-k)非常SP行动者和也就是说的HD行动者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的象征性性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR隐含展开除去，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(环纹)和SP(黑斑)四组以及NADPSP 606(黄色)里面CD25+ cd127的Hz简介布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控长有界的箱线或布;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含气压纹理，圆圈突出的簇被辨识为SP和HD数据流之间的不同。(j)箱线或布辨识了在SP(黑斑)和HD(灰点)四组里面，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对稀土元素(数量)。(k)直方布辨识每个簇的表HG(粉红色)和Treg标有相对隐含与故事情节隐含(深蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。故事情节与所有其他簇里面标有的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证

布3 与身心健康献血者远比，成果很慢者知觉treg的GITR减小。每个知觉CD4+T蛋白元簇(知觉T蛋白_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T蛋白;HLA-DR + GITR +知觉T蛋白;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个隐含标有的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的隐含热布(sp606不仅限于在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里面所有HD(红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR隐含串联，辨识直方布(c)和简介布(d)。Wilcoxon配对符号秩和验证，p< 0.07(黄色)所有NADP仅限于，p< 0.05(深蓝色)NADPSP 606和也就是说的HD不仅限于在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR隐含，从分级门控，从所有HD(红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(黄色)串联，辨识直方布(e)和简介布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验证

布4 来自很慢成果的CD4+ treg蛋白依靠畸变CD4+T蛋白的能力提高。SP四组用深蓝色的线或和圆圈坚称，HD四组用银色的线或和圆圈坚称，黄色的线或/圆圈坚称NADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(转发者)被标有为CFSE, Treg按掩蔽的数量校准。用抗CD3 /28微珠酪氨酸蛋白，人才3天后展开流式蛋白绝技样品。(a-d)与CD4+转发者相对应的treg人才(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者人才。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE依赖性多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性多于。用于感染性比对(激活的响应蛋白不含treg)计算依赖性多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

布5 畸变CD4+T蛋白对很慢成果的T蛋白酪氨酸的依赖性更敏感。SP四组用深蓝色的线或和圆圈坚称，HD四组用银色的线或和圆圈坚称，黄色的线或/圆圈坚称NADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标有，treg按掩蔽的数量校准。用抗CD3 /28微珠酪氨酸蛋白，人才3天后展开流式蛋白绝技(CD25反染)和蛋白因长子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同人才。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE依赖性次之(b)。(c,d) CD25依赖性次之(c)和CD134依赖性次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才里面的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

结论：我们得出结论的结论是，来自很慢成果长子的酪氨酸知觉CD4+Treg在GITR隐含里面给予了延展和丰沛，忽视了进一步数据分析方法Treg在1HG哮喘风险个形体里面的异质性的必要性。

原文原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28